Mateschitz 1972-ben diplomázott a Bécsi Közgazdasági Egyetemen. Első munkahelye az Unilevernél volt, majd a Procter & Gamble tulajdonában lévő Blendax német kozmetikai vállalat következett. Mosópor és fogkrém után egy elég éles váltással energiaital-gyártás következett: ázsiai üzleti útjai alatt bukkant rá a Krating Daengre, egy szénsavmentes, édes, taurin- és koffeintartalmú italra, amit egy bizonyos Chaleo Yoovidhya gyártott. A szó szerinti fordításban Red Bull (Vörös bika) nevű italt Mateschitz és Yoovidhya 1984-ben vezette be az európai piacra. A cégbe az osztrák üzletember félmillió dollárt invesztált.
Mateschitz már a kezdetektől fogva hitt abban, hogy az autóversenyzést és az extrém sportokat promóciós eszközként kell használni az ital népszerűsítése érdekében. A Red Bull 1995-ben lépett be az F1-be a Sauber-csapat partnereként, majd 60 százalékos érdekeltséget szerzett az istállóban. A Red Bull-korszakban olyan pilóták fordultak meg a Saubernél, mint Johnny Herbert, Jean Alesi, Mika Salo, Nick Heidfeld, Giancarlo Fisichella és Felipe Massa.
Az együttműködés 2001-ben ért véget, de a Red Bull nem távozott az F1-ből, sőt: 2004 novemberében névleges összegért megvásárolták a Jaguar Racinget a korábbi tulajdonos Fordtól, és átnevezték Red Bull Racingre. Még ugyanebben az évben Mateschitz megvásárolta az osztrák A1-Ringet is, ami 2011 májusában nyitottak meg újra, majd átfogó felújítási munkálatok után Red Bull Ringre keresztelték át.
Egy évvel később Gerhard Bergerrel közösen megvásárolta a Minardit, és megszületett a Scuderia Toro Rosso. Az eredeti elképzelés az volt, hogy a csapat a RBR számára neveljen ki fiatal versenyzőket. Ez olyannyira jól sikerült, hogy Sebastian Vettel 2008-ban megszerezte a Torro Rosso első futamgyőzelmét Monzában. Vettel a Red Bull Racing színeiben aztán 2010-ben világbajnok lett, ahogy 2011-ben, 2012-ben és 2013-ban is.
Az autósporton kívül Mateschitz tucatnyi más sportágban látott fantáziát: megvásárolta az SV Austria Salzburg és a New York MetroStars labdarúgóklubokat, és átnevezte őket Red Bull Salzburgra és New York Red Bullsra. 2009-ben megalapította az RB Leipzig labdarúgócsapatot, és ő a tulajdonosa az EHC München német jégkorongklubnak is, amelynek nevét Red Bull Münchenre változtatta. Az üzleti és sportéletben elért hatalmas sikerei ellenére Mateschitz alapvetően zárkózott ember maradt, és ritkán nyilatkozott a médiának.
